詳細講解膠體金免疫層析技術(shù)檢測原理及方法應用

什么是膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)是以膠體金作為示蹤標志物，應用于抗原抗體反應中的一種新型免疫標記技術(shù)。膠體金是由氯金酸水溶液在還原劑作用下，聚合成特定大小的金顆粒，顆粒之間因靜電作用形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，也稱金溶膠。膠體金由于具有膠體穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)強吸附性和高電子密度等特性，在金標蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而可用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。

膠體金免疫層析技術(shù)的原理

膠體金免疫層析技術(shù)就是以膠體金為顯色媒介，利用免疫學中抗原抗體能夠特異性結(jié)合原理，在層析過程中完成這一反應，從而達到檢測的目的。膠體金免疫層析技術(shù)的原理是樣品中目標物與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測線（T線）上偶聯(lián)抗原的免疫反應，從而導致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中目標物進行定性檢測。

將特異的抗體或抗原以條帶狀固定在硝酸纖維素（NC）膜上的某一區(qū)域，該區(qū)域有控制線和顯示結(jié)果的測試線，當樣品加入膜一端（如加樣孔）時，借助毛細管作用向前移動，樣品沿著膜運動到達該區(qū)域后，樣品中相應的抗原或抗體與該抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，使該區(qū)域顯示一定的顏色，通過可目測的膠體金標記物得到直觀的顯色結(jié)果，而流離標記物則越過這一區(qū)域，達到自動分離的目的。該方法用肉眼即可判讀檢測結(jié)果，可實現(xiàn)目標物的快速檢測。膠體金免疫層析法就是利用膠體金本身的顯色特點結(jié)合免疫層析技術(shù)用來診斷特異性的待測物。

膠體金免疫層析技術(shù)的方法

膠體金免疫層析當下的檢測方法非常的多，有間接法、夾心法、雙抗體夾心法、競爭法以及捕獲法。

1、間接法是用膠體金來標記二抗，像是沒有標記的特異性與已知抗原結(jié)合，間接法經(jīng)常是用在檢測血清樣本中的病毒上；

2、雙抗夾心法就是用在檢測病原微生物性的大分子抗原，早早孕試紙就是用這個方法；

3、競爭法經(jīng)常用在濫用藥物、農(nóng)藥殘留食品添加劑等檢測上；

4、捕獲法是用在風疹病毒、艾滋病等檢測

非競爭性作用原理即雙抗體夾心法：

檢測試劑是一種與乳膠顆?；蚰z體金屬(一般采用膠體金)相偶聯(lián)的待測抗原的特異性配體(即抗體Abl)，所謂特異性：就是某種抗體專一性的識別結(jié)合某種抗原決定簇。它被沉積在結(jié)合墊上。當樣品(尿、血漿、全血等)加到樣品墊后，由于毛細管作用，樣品迅速浸透結(jié)合墊，檢測試劑被溶解，并隨著樣品流沿膜條向前移動。若樣品中存在待測抗原，它就會和檢測試劑中的抗體結(jié)合形成Ag—Abl。隨后，樣品通過固化有捕獲試劑(一般是待測抗原的另一表位特異性抗體Ab2)的測試線(testline)區(qū)域，將待測抗原一檢測試劑復合物捕獲形成Abl—Ag—Ab2復合物。樣品繼續(xù)前移，通過固化有抗Abl抗體(二抗Ab3)的質(zhì)控線(control line)區(qū)域，形成Ab3一Abl—Ag—Ab2復合物。這種方式通常用于檢測帶有多個抗原位點的分析，如絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)等。

競爭性作用的原理：

檢測試劑仍是與乳膠顆?；蚰z體金結(jié)合的抗體(Abl)，而捕獲試劑則是待測抗原或待測抗原的模擬物。若樣品中含有待測抗原，則樣品和檢測試劑形成復合物(Ag—Abl)，即樣品中的待測抗原將檢測試劑中的抗體完全飽和。隨后在通過已固化有捕獲試劑的區(qū)域時，不再發(fā)生反應，測試線處不顯色；樣品繼續(xù)前移。復合物(Ag—Abl)被已固化在質(zhì)控線處的抗Abl的抗體(二抗Ab2)所結(jié)合，形成Abl—Ag—Ab2復合物，使質(zhì)控線顯色。這種方式適用于檢測帶有單一抗原表位的小分子抗原，常用于違禁藥物的檢測等。

膠體金標記技術(shù)是繼三大標記技術(shù)（熒光抗體技術(shù)、放射免疫分析和酶免疫技術(shù)，即經(jīng)典的三大標記技術(shù)）之后，又一較為成熟且已得到廣泛應用的免疫標記技術(shù)。 膠體金檢測技術(shù)以其獨特的應用優(yōu)勢，該技術(shù)因其操作簡便、觀察直觀、靈敏度高、價格低廉等優(yōu)點在醫(yī)學、農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)獸藥殘留生物學、生物芯片以及病原微生物檢測等領域發(fā)揮著重要作用。其穩(wěn)定性好、安全、簡便，且不需任何儀器設備等優(yōu)點，使其在多個領域得到廣泛應用。